酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）是一種廣泛應(yīng)用測(cè)定樣本中的蛋白、抗體或激素的的免疫分析技術(shù)。ELISA將蛋白、抗體、或激素等（即抗原）直接或是以捕捉抗體固定在固相載體上，再加入含有待測(cè)抗體，形成一個(gè)抗原抗體的復(fù)合物。如果該抗體已經(jīng)用酶標(biāo)記了，可以直接來(lái)檢測(cè)抗原的量，如沒(méi)有，則可以用酶標(biāo)二抗來(lái)測(cè)定抗原的量。加入酶的底物，底物產(chǎn)生出現(xiàn)的顏色深淺和樣本中的抗原呈正比的關(guān)系，依此原理計(jì)算出樣本的抗原總量和濃度。結(jié)合ELISA原理，ELISA分為4種方法，每種方法優(yōu)缺點(diǎn)不同。下面通蔚生物為大家詳細(xì)介紹一下。
將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的抗體，即可測(cè)定抗原總量。
優(yōu)勢(shì)：直接elisa法操作簡(jiǎn)單，因不需要二抗，避免交叉反應(yīng)
缺勢(shì)：實(shí)驗(yàn)中一抗需酶標(biāo)，并不是所有抗體都需要酶標(biāo)，成本相對(duì)較高
此方法和直接ELISA法區(qū)別不是很大，多了酶標(biāo)二抗，用酶標(biāo)二抗去辨識(shí)一抗來(lái)測(cè)定抗原的量。
優(yōu)勢(shì)：二抗可以加強(qiáng)信號(hào)
缺勢(shì)：交叉反應(yīng)發(fā)生機(jī)率較高
被檢測(cè)的抗原包被在2個(gè)抗體之間，其中一個(gè)抗體將抗原固定于固相載體上，既捕捉抗體。另一個(gè)是檢測(cè)抗體，此抗體可以用酶標(biāo)記后直接測(cè)定抗原的量；或者不標(biāo)記，在使用酶標(biāo)二抗來(lái)測(cè)定抗原的量。這2種抗體要小心選擇，才可避免交叉反應(yīng)或競(jìng)爭(zhēng)相同抗原結(jié)合部位。
優(yōu)勢(shì)：高靈敏、高專(zhuān)一性、抗原無(wú)須事先純化。
缺勢(shì)：抗原一定要擁有兩個(gè)以上抗體結(jié)合部位
樣本里的抗原和純化并固定在固相載體上的抗原一起競(jìng)爭(zhēng)相同的抗體，當(dāng)樣品中的抗原越多，就可以結(jié)合越多的抗體，而固定的抗原就只能結(jié)合較少的抗體，
優(yōu)勢(shì)：可適用比較不純的樣本，而且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性很高。
缺勢(shì)：整體的敏感性和專(zhuān)一性都較差。
上述是ELISA實(shí)驗(yàn)4種較為常見(jiàn)的方法優(yōu)缺點(diǎn)對(duì)比。每種方法對(duì)應(yīng)不同實(shí)驗(yàn)需求和樣本，才能事半功倍。
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