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當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除掉，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測特異性抗體。其原理為標(biāo)本中的抗體和一定量的酶標(biāo)抗體競賽與固相抗原結(jié)合。

標(biāo)本中抗體量越多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗體愈少，因此陽性反響呈色淺于陰性反響。如抗原為高純度的，可直接包被固相。如抗原中會(huì)有干擾物質(zhì)，直接包被不易成功，可選用捕獲包被法，即先包被與固相抗原相應(yīng)的抗體，然后參加抗原，構(gòu)成固相抗原。

洗刷除掉抗原中的雜質(zhì)，然后再加標(biāo)本和酶標(biāo)抗體進(jìn)行競賽結(jié)合反響。競賽法測抗體有多種形式，可將標(biāo)本和酶標(biāo)抗體與固相抗原競賽結(jié)合，抗HBc 。

ELISA一般選用此法。另一種形式為將標(biāo)本與抗原一起參加到固相抗體中進(jìn)行競賽結(jié)合，洗刷后再參加酶標(biāo)抗體，與結(jié)合在固相上的抗原反響。抗HBe的檢測一般選用此法。 
 
小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，能夠選用競賽法形式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競賽與固相抗體結(jié)合。標(biāo)本中抗原量含量愈多，結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，終的顯色也愈淺。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。